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液相色谱仪实验操作
点击次数:522 发布时间:2016-11-21


为避免急性运动的影响所以在末次训练结束后24小时取材运动组和对照组交替进
行。大鼠称重后用30mg/耐的戊巴比妥钠腹腔麻醉(lml/Kg体重)经右颈总动脉取血后
迅速断头处死。剔除头部皮毛蒸馏水冲洗干净立即投入液氮中冷冻储存备用。从背部正
中剪开皮肤分开腰椎附近的肌肉暴露椎骨剪取胸10一腰3部的脊髓(T10一L3;)立
即投入液氮中冷冻储存备用。立即打开腹腔取出脾脏去除脂肪组织和被膜4℃预冷生理
盐水冲洗干净滤纸吸干精密天平称重后迅速用小手术剪刀略微剪碎混合均匀后分成两
份置于液氮中保存备用。
从液氮中取出大鼠头部用钳骨钳剪开颅骨小心取出完整的脑组织准确剥离下丘脑
结节部和延髓中间部迅速冰冻待测(各脑区取样范围见表9)。从液氮中取出大鼠脊椎用
钳骨钳小心剪开椎板暴露脊髓准确取出完整的腰l一腰3段脊髓(Ll一L5)迅速冰冻
待测。上述操作均在冰盘中进行若操作过程中样品升温变软难于成形则置于冰冻切片机
中冷冻取出继续操作。
 
为准确采集自主神经中枢内相关神经核团的组织本研究用冰冻切片结合显微放大和图
谱定位技术辅助进行采样。操作如下:剥离的下丘脑结节部、延髓中部和L1一L3段脊髓分
别进行冰冻切片下丘脑切片厚度 60um延髓切片厚度 60um脊髓切片厚度90um。切
片置于10倍放大镜下根据王平宇《大鼠脑读片提要及图谱》所示用7号注射器针头采
集相应神经核团部位(下丘脑结节部、迷走神经背核部、脊髓中间外侧核部)的组织置分析
天平上称重并记录。取得的全部样品置于一80℃冰箱中保存待测。
(2)单胺类神经递质的测定
①样品前处理
取出待测组织每10Omg组织(或100耐血液)加入预冷的800ul 0.4mol/LHCIO;(含0.1%
抗坏血酸)在冰浴中匀浆。4
o
C下14000r/min离心两次每次15分钟。取上清 200ul加
入预冷的200mol/L的柠檬酸钾缓冲液 100ul。4℃静置lh14000r/min离心20min。取上
清 20ul进样。
标准品制备:用ER一182A型电子分析天平称取NE、E、DA、HVA、DOPAC标准品一
定量分别用0.lmol/L的HCL溶液配成 20ug/m1标准液贮备液分装后放入一80
0
C冷冻贮
存使用时取各自的标准储备液分别精确量取该储备液10ul、 25ul· 50ul、100u1、 150ul
分别置量瓶中用流动相稀释至lml摇匀取20ul注入液相色谱仪每次进两针计算平
均峰面积以峰面积一浓度计算各自的回归方程。
②高压液相色谱一电化学检测法(HPLC一EDC)
.测试指标:
多巴胺(DopamineDA)、34一二羟基苯乙酸(34一dihydroxyphey lacetic acidDOPAC)、
3一甲氧一4一羟基苯乙酸 (homovanillic acidHVA)、肾上腺素(epinephrineE)、去甲肾
上腺素(noradrenalineNE)。
 
.层析条件
仪器为液相色谱仪(日本岛津公司)和库仑电化学检测器(5600A型美国ESA公司);流动
相为100mmol/L柠檬酸钠(PH4.O)100mmol/L的EDTA
2
NA70mmol/L八烷基硫酸20%
甲醇;迪马C18柱(美国)玻璃碳工作电极 Ag/AgCI参比电极;施加电势O~500mv;恒流工
作状态流速1m1/min;温度(24士l)℃。

为避免急性运动的影响所以在末次训练结束后24小时取材运动组和对照组交替进
行。大鼠称重后用30mg/耐的戊巴比妥钠腹腔麻醉(lml/Kg体重)经右颈总动脉取血后
迅速断头处死。剔除头部皮毛蒸馏水冲洗干净立即投入液氮中冷冻储存备用。从背部正
中剪开皮肤分开腰椎附近的肌肉暴露椎骨剪取胸10一腰3部的脊髓(T10一L3;)立
即投入液氮中冷冻储存备用。立即打开腹腔取出脾脏去除脂肪组织和被膜4℃预冷生理
盐水冲洗干净滤纸吸干精密天平称重后迅速用小手术剪刀略微剪碎混合均匀后分成两
份置于液氮中保存备用。
从液氮中取出大鼠头部用钳骨钳剪开颅骨小心取出完整的脑组织准确剥离下丘脑
结节部和延髓中间部迅速冰冻待测(各脑区取样范围见表9)。从液氮中取出大鼠脊椎用
钳骨钳小心剪开椎板暴露脊髓准确取出完整的腰l一腰3段脊髓(Ll一L5)迅速冰冻
待测。上述操作均在冰盘中进行若操作过程中样品升温变软难于成形则置于冰冻切片机
中冷冻取出继续操作。
 
为准确采集自主神经中枢内相关神经核团的组织本研究用冰冻切片结合显微放大和图
谱定位技术辅助进行采样。操作如下:剥离的下丘脑结节部、延髓中部和L1一L3段脊髓分
别进行冰冻切片下丘脑切片厚度 60um延髓切片厚度 60um脊髓切片厚度90um。切
片置于10倍放大镜下根据王平宇《大鼠脑读片提要及图谱》所示用7号注射器针头采
集相应神经核团部位(下丘脑结节部、迷走神经背核部、脊髓中间外侧核部)的组织置分析
天平上称重并记录。取得的全部样品置于一80℃冰箱中保存待测。
(2)单胺类神经递质的测定
①样品前处理
取出待测组织每10Omg组织(或100耐血液)加入预冷的800ul 0.4mol/LHCIO;(含0.1%
抗坏血酸)在冰浴中匀浆。4
o
C下14000r/min离心两次每次15分钟。取上清 200ul加
入预冷的200mol/L的柠檬酸钾缓冲液 100ul。4℃静置lh14000r/min离心20min。取上
清 20ul进样。
标准品制备:用ER一182A型电子分析天平称取NE、E、DA、HVA、DOPAC标准品一
定量分别用0.lmol/L的HCL溶液配成 20ug/m1标准液贮备液分装后放入一80
0
C冷冻贮
存使用时取各自的标准储备液分别精确量取该储备液10ul、 25ul· 50ul、100u1、 150ul
分别置量瓶中用流动相稀释至lml摇匀取20ul注入液相色谱仪每次进两针计算平
均峰面积以峰面积一浓度计算各自的回归方程。
②高压液相色谱一电化学检测法(HPLC一EDC)
.测试指标:
多巴胺(DopamineDA)、34一二羟基苯乙酸(34一dihydroxyphey lacetic acidDOPAC)、
3一甲氧一4一羟基苯乙酸 (homovanillic acidHVA)、肾上腺素(epinephrineE)、去甲肾
上腺素(noradrenalineNE)。
 
.层析条件
仪器为液相色谱仪(日本岛津公司)和库仑电化学检测器(5600A型美国ESA公司);流动
相为100mmol/L柠檬酸钠(PH4.O)100mmol/L的EDTA
2
NA70mmol/L八烷基硫酸20%
甲醇;迪马C18柱(美国)玻璃碳工作电极 Ag/AgCI参比电极;施加电势O~500mv;恒流工
作状态流速1m1/min;温度(24士l)℃。

为避免急性运动的影响所以在末次训练结束后24小时取材运动组和对照组交替进
行。大鼠称重后用30mg/耐的戊巴比妥钠腹腔麻醉(lml/Kg体重)经右颈总动脉取血后
迅速断头处死。剔除头部皮毛蒸馏水冲洗干净立即投入液氮中冷冻储存备用。从背部正
中剪开皮肤分开腰椎附近的肌肉暴露椎骨剪取胸10一腰3部的脊髓(T10一L3;)立
即投入液氮中冷冻储存备用。立即打开腹腔取出脾脏去除脂肪组织和被膜4℃预冷生理
盐水冲洗干净滤纸吸干精密天平称重后迅速用小手术剪刀略微剪碎混合均匀后分成两
份置于液氮中保存备用。
从液氮中取出大鼠头部用钳骨钳剪开颅骨小心取出完整的脑组织准确剥离下丘脑
结节部和延髓中间部迅速冰冻待测(各脑区取样范围见表9)。从液氮中取出大鼠脊椎用
钳骨钳小心剪开椎板暴露脊髓准确取出完整的腰l一腰3段脊髓(Ll一L5)迅速冰冻
待测。上述操作均在冰盘中进行若操作过程中样品升温变软难于成形则置于冰冻切片机
中冷冻取出继续操作。
 
为准确采集自主神经中枢内相关神经核团的组织本研究用冰冻切片结合显微放大和图
谱定位技术辅助进行采样。操作如下:剥离的下丘脑结节部、延髓中部和L1一L3段脊髓分
别进行冰冻切片下丘脑切片厚度 60um延髓切片厚度 60um脊髓切片厚度90um。切
片置于10倍放大镜下根据王平宇《大鼠脑读片提要及图谱》所示用7号注射器针头采
集相应神经核团部位(下丘脑结节部、迷走神经背核部、脊髓中间外侧核部)的组织置分析
天平上称重并记录。取得的全部样品置于一80℃冰箱中保存待测。
(2)单胺类神经递质的测定
①样品前处理
取出待测组织每10Omg组织(或100耐血液)加入预冷的800ul 0.4mol/LHCIO;(含0.1%
抗坏血酸)在冰浴中匀浆。4
o
C下14000r/min离心两次每次15分钟。取上清 200ul加
入预冷的200mol/L的柠檬酸钾缓冲液 100ul。4℃静置lh14000r/min离心20min。取上
清 20ul进样。
标准品制备:用ER一182A型电子分析天平称取NE、E、DA、HVA、DOPAC标准品一
定量分别用0.lmol/L的HCL溶液配成 20ug/m1标准液贮备液分装后放入一80
0
C冷冻贮
存使用时取各自的标准储备液分别精确量取该储备液10ul、 25ul· 50ul、100u1、 150ul
分别置量瓶中用流动相稀释至lml摇匀取20ul注入液相色谱仪每次进两针计算平
均峰面积以峰面积一浓度计算各自的回归方程。
②高压液相色谱一电化学检测法(HPLC一EDC)
.测试指标:
多巴胺(DopamineDA)、34一二羟基苯乙酸(34一dihydroxyphey lacetic acidDOPAC)、
3一甲氧一4一羟基苯乙酸 (homovanillic acidHVA)、肾上腺素(epinephrineE)、去甲肾
上腺素(noradrenalineNE)。
 
.层析条件
仪器为液相色谱仪(日本岛津公司)和库仑电化学检测器(5600A型美国ESA公司);流动
相为100mmol/L柠檬酸钠(PH4.O)100mmol/L的EDTA
2
NA70mmol/L八烷基硫酸20%
甲醇;迪马C18柱(美国)玻璃碳工作电极 Ag/AgCI参比电极;施加电势O~500mv;恒流工
作状态流速1m1/min;温度(24士l)℃。

为避免急性运动的影响所以在末次训练结束后24小时取材运动组和对照组交替进
行。大鼠称重后用30mg/耐的戊巴比妥钠腹腔麻醉(lml/Kg体重)经右颈总动脉取血后
迅速断头处死。剔除头部皮毛蒸馏水冲洗干净立即投入液氮中冷冻储存备用。从背部正
中剪开皮肤分开腰椎附近的肌肉暴露椎骨剪取胸10一腰3部的脊髓(T10一L3;)立
即投入液氮中冷冻储存备用。立即打开腹腔取出脾脏去除脂肪组织和被膜4℃预冷生理
盐水冲洗干净滤纸吸干精密天平称重后迅速用小手术剪刀略微剪碎混合均匀后分成两
份置于液氮中保存备用。
从液氮中取出大鼠头部用钳骨钳剪开颅骨小心取出完整的脑组织准确剥离下丘脑
结节部和延髓中间部迅速冰冻待测(各脑区取样范围见表9)。从液氮中取出大鼠脊椎用
钳骨钳小心剪开椎板暴露脊髓准确取出完整的腰l一腰3段脊髓(Ll一L5)迅速冰冻
待测。上述操作均在冰盘中进行若操作过程中样品升温变软难于成形则置于冰冻切片机
中冷冻取出继续操作。
 
为准确采集自主神经中枢内相关神经核团的组织本研究用冰冻切片结合显微放大和图
谱定位技术辅助进行采样。操作如下:剥离的下丘脑结节部、延髓中部和L1一L3段脊髓分
别进行冰冻切片下丘脑切片厚度 60um延髓切片厚度 60um脊髓切片厚度90um。切
片置于10倍放大镜下根据王平宇《大鼠脑读片提要及图谱》所示用7号注射器针头采
集相应神经核团部位(下丘脑结节部、迷走神经背核部、脊髓中间外侧核部)的组织置分析
天平上称重并记录。取得的全部样品置于一80℃冰箱中保存待测。
(2)单胺类神经递质的测定
①样品前处理
取出待测组织每10Omg组织(或100耐血液)加入预冷的800ul 0.4mol/LHCIO;(含0.1%
抗坏血酸)在冰浴中匀浆。4
o
C下14000r/min离心两次每次15分钟。取上清 200ul加
入预冷的200mol/L的柠檬酸钾缓冲液 100ul。4℃静置lh14000r/min离心20min。取上
清 20ul进样。
标准品制备:用ER一182A型电子分析天平称取NE、E、DA、HVA、DOPAC标准品一
定量分别用0.lmol/L的HCL溶液配成 20ug/m1标准液贮备液分装后放入一80
0
C冷冻贮
存使用时取各自的标准储备液分别精确量取该储备液10ul、 25ul· 50ul、100u1、 150ul
分别置量瓶中用流动相稀释至lml摇匀取20ul注入液相色谱仪每次进两针计算平
均峰面积以峰面积一浓度计算各自的回归方程。
②高压液相色谱一电化学检测法(HPLC一EDC)
.测试指标:
多巴胺(DopamineDA)、34一二羟基苯乙酸(34一dihydroxyphey lacetic acidDOPAC)、
3一甲氧一4一羟基苯乙酸 (homovanillic acidHVA)、肾上腺素(epinephrineE)、去甲肾
上腺素(noradrenalineNE)。
 
.层析条件
仪器为液相色谱仪(日本岛津公司)和库仑电化学检测器(5600A型美国ESA公司);流动
相为100mmol/L柠檬酸钠(PH4.O)100mmol/L的EDTA
2
NA70mmol/L八烷基硫酸20%
甲醇;迪马C18柱(美国)玻璃碳工作电极 Ag/AgCI参比电极;施加电势O~500mv;恒流工
作状态流速1m1/min;温度(24士l)℃。
 

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